磷酸化是细胞内最常见的也是最重要的蛋白质翻译后修饰之一。在真核细胞中，大约1/3的蛋白质会被磷酸化。蛋白质磷酸化是通过蛋白激酶催化将ATP或GTP的γ位磷酸基转移到底物蛋白质的氨基酸残基上（主要是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸）上的过程。并且这一过程是可逆的，其逆过程由蛋白磷酸酯酶催化，称为蛋白质去磷酸化。

磷酸化修饰是一种可逆的“分子开关”，其具体生物学功能主要包括调控蛋白质活性、调节蛋白质相互作用、控制蛋白质亚细胞定位、参与细胞信号转导、调控细胞周期、参与代谢调控等，这对于维持细胞的正常功能、适应环境变化以及应对疾病状态等具有重要意义。

O-磷酸化：是最常见的类型，修饰位点为丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）的侧链羟基。例如，许多信号通路中的关键蛋白（如MAPK家族）通过丝氨酸/苏氨酸磷酸化调节活性，而酪氨酸磷酸化在生长因子受体信号传导中起关键作用。

N-磷酸化：修饰位点为组氨酸（His）、赖氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）的侧链氨基。此类修饰在原核生物中较为常见，但在真核生物中也有一定比例，例如某些激酶可通过N-磷酸化调节底物蛋白的活性或定位。

S-磷酸化：修饰位点为半胱氨酸（Cys）的侧链巯基。此类修饰相对较少见，但在特定生理过程中（如氧化应激响应）可能发挥作用。

羧基磷酸化：修饰位点为天冬氨酸（Asp）和谷氨酸（Glu）的侧链羧基。此类修饰在某些代谢酶或信号蛋白中存在，可能通过改变蛋白质的电荷状态或构象影响其功能。

Western Blot（WB）：也叫蛋白免疫印迹法，通常用作定性分析和修饰位点检测，原理是通过SDS-PAGE将总蛋白按照不同的分子量大小进行分离，然后通过电场将胶上的蛋白质转印到膜介质上，再利用特异性磷酸化抗体对蛋白质磷酸化特定修饰位点进行结合和识别。

ELISA（酶联免疫吸附测定）：通常用作定量检测，原理是基于抗原与抗体的特异性结合以及酶的催化显色反应，通过将抗原或抗体固定在固相载体上，利用酶标记的抗体或抗原与待测样本中的目标分子发生反应，最终通过测定显色产物的吸光度来反映抗原或抗体含量。